組織細(xì)胞培養(yǎng)室除一般實(shí)驗(yàn)室的普通常規(guī)設(shè)備外，尚有一些特殊需要的設(shè)備?；究煞譃閮纱箢悾?*類為常用的基本設(shè)備；第二類為較**的特殊設(shè)備。

1. 常用的基本設(shè)備

（1） 儀器：

a）顯微鏡：倒置顯微鏡——是組織細(xì)胞培養(yǎng)室所必需的日常工作常規(guī)使用設(shè)備之一，便于掌握細(xì)胞的生長情況并觀察有無污染等。

——若有條件，尚可配置帶有照相系統(tǒng)的高質(zhì)量相差顯微鏡、解剖顯微鏡、熒光顯微鏡、錄像系統(tǒng)或縮時(shí)電影拍攝裝置等，以便隨時(shí)觀察、記錄、攝影細(xì)胞生長情況。

b） 培養(yǎng)箱：體外培養(yǎng)的細(xì)胞和體內(nèi)細(xì)胞一樣，需要在恒定的溫度下生存，大多數(shù)情況下，**適溫度是37℃，溫差變化一般不應(yīng)超過±0.5℃，細(xì)胞在溫度升高2℃時(shí)，持續(xù)數(shù)小時(shí)即不能耐受，40℃以上將很快死亡。因此需要有能控制溫度的培養(yǎng)箱，如具有較高靈敏度的恒溫培養(yǎng)箱及CO2培養(yǎng)箱。

恒溫培養(yǎng)箱——應(yīng)選隔水式或晶體管自控溫培養(yǎng)箱，此類培養(yǎng)箱靈敏度高，溫度控制較穩(wěn)定。一般的恒溫培養(yǎng)箱價(jià)格較便宜，其缺點(diǎn)是只宜于作密閉式培養(yǎng)。

CO2培養(yǎng)箱——目前多數(shù)的細(xì)胞培養(yǎng)室已廣泛使用。CO2培養(yǎng)箱的優(yōu)點(diǎn)是能夠提供進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)所需要的一定量的CO2（常用濃度為5％），易于使培養(yǎng)液的pH保持穩(wěn)定，適用于開放或半開放培養(yǎng)。培養(yǎng)細(xì)胞的器皿可用培養(yǎng)皿、培養(yǎng)板或培養(yǎng)瓶；當(dāng)使用培養(yǎng)瓶時(shí)，可將瓶蓋略微旋松，使培養(yǎng)瓶內(nèi)與外界保持通氣狀態(tài)。由于這種培養(yǎng)方法培養(yǎng)器皿內(nèi)部與外界相通，培養(yǎng)箱內(nèi)空氣必須保持清潔，應(yīng)定期以紫外線照射或酒精消毒。同時(shí)培養(yǎng)箱應(yīng)放置盛有無菌蒸餾水的水槽，防止培養(yǎng)液蒸發(fā)，使箱內(nèi)相對(duì)濕度始終保持為100％。

c）干燥箱：用于細(xì)胞培養(yǎng)箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用，玻璃器皿等須干熱消毒。干熱消毒時(shí)，電熱干燥箱升溫較高，一般需達(dá)到160℃以上。通常使用鼓風(fēng)式電熱干燥箱。其優(yōu)點(diǎn)是溫度均勻、效果較好，缺點(diǎn)是升溫過程較慢。升溫時(shí)不能先升溫后鼓風(fēng)而應(yīng)鼓風(fēng)與升溫同時(shí)開始，**100℃時(shí)，停止鼓風(fēng)，應(yīng)避免包裹器皿的紙或棉花燒焦，燒焦的碎屑可影響細(xì)胞的生長。消毒后，不能立即打開箱門以免驟冷而導(dǎo)致玻璃器皿損壞，應(yīng)等候溫度自然下降**100℃以下方可開門。

d）水純化裝置：細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)水的質(zhì)量要求較高，細(xì)胞培養(yǎng)以及與細(xì)胞培養(yǎng)工作相關(guān)的液體的配制用水必須事先嚴(yán)格純化處理。水純化時(shí)可采用離子交換裝置或蒸餾器。離子交換純水尚不能有效去除有機(jī)物，因此用水時(shí)尚需再次蒸餾。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)配制各種培養(yǎng)液及試劑等均需使用三次蒸餾水：即使是用于玻璃器皿的沖洗，也應(yīng)使用二次以上蒸餾水。

目前G內(nèi)使用較多的是自動(dòng)雙重純水蒸餾器（石英管加熱），使用方便，安全、蒸餾速度快（1600ml/h）。

使用注意：

○a不可采用普通自來水蒸餾，以免蒸餾器內(nèi)很快結(jié)成水垢影響蒸餾效果；同時(shí)，還需視蒸餾器內(nèi)存水垢程度定期徹底清洗蒸餾器。

○b正確的使用方法是將經(jīng)金屬蒸餾器蒸餾的蒸餾水加入玻璃蒸餾器內(nèi)進(jìn)行再次蒸餾。

一般配制培養(yǎng)液的用水應(yīng)在配液前蒸餾，不宜使用存放數(shù)日的三蒸水，以免影響培養(yǎng)用水的質(zhì)量。

目前市場(chǎng)上供應(yīng)的是含有各種級(jí)別和類型的采用一種或多種純化方法相結(jié)合的使普通水純化為純水和超純水的純水系統(tǒng)可供選擇。例如：設(shè)計(jì)靈活的可以掛壁、也可為臺(tái)式，也可以有儲(chǔ)水箱、也可直接用分液槍的純水裝置；還可根據(jù)各類實(shí)驗(yàn)用水需求選擇配備有效殺菌或去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等，甚**可有效去除掉熱源、內(nèi)毒素的超濾型純水器。

e）冰箱：細(xì)胞培養(yǎng)室必須配備

○a普通冰箱或冷藏柜

——儲(chǔ)存培養(yǎng)液、生理鹽水、Hank’s液試劑等培養(yǎng)用的物品及短期保存組織標(biāo)本。

○b低溫冰箱（-20℃）、超低溫冰箱

——用于儲(chǔ)存需要冷凍保存生物活性及較長時(shí)期存放的制劑，如酶、血清等。

——細(xì)胞培養(yǎng)室的冰箱應(yīng)屬專用，不得存放易揮發(fā)、易燃燒等對(duì)細(xì)胞有害的物質(zhì)，且應(yīng)保持清潔。

f）細(xì)胞冷凍儲(chǔ)存器：儲(chǔ)存器常用的是液氮容器。根據(jù)使用需要分為不同的類型及多種規(guī)格。選擇購置液氮容器時(shí)要綜合考慮容積大小，取放使用方便及液氮揮發(fā)量（經(jīng)濟(jì)）三種因素。液氮容器的大小可自25L～500L，可以儲(chǔ)存1ml的安瓿250～15000個(gè)左右。液氮溫度可低達(dá)-196℃，使用時(shí)應(yīng)防止凍傷。由于液氮不斷揮發(fā)，應(yīng)注意觀察存留液氮情況，及時(shí)定期補(bǔ)充液氮，避免揮發(fā)過多而致細(xì)胞受損。

目前，G內(nèi)各類實(shí)驗(yàn)室已廣泛使用新型的細(xì)胞冷凍儲(chǔ)存器。市場(chǎng)所提供的各種新型的細(xì)胞冷凍儲(chǔ)存器具有性能優(yōu)異，使用方便等特點(diǎn)。例如：

——可通過先進(jìn)的電子控制器實(shí)現(xiàn)凍存自動(dòng)化并監(jiān)測(cè)液氮水平和樣品溫度，確保樣品溫度始終處于設(shè)定溫度點(diǎn)；

——可配備先進(jìn)的報(bào)警系統(tǒng)，分別警報(bào)液氮液面、溫度、電池、電壓、電源等失常情況：

——同時(shí)具備熱氣體旁路系統(tǒng)，防止高于-130℃的暖空氣進(jìn)入液氮罐，從而更有效地保護(hù)樣品，防止升溫。

另外，多種規(guī)格的先進(jìn)液氮運(yùn)輸，供應(yīng)罐系列不僅移動(dòng)方便，還可通過連接管給儲(chǔ)存罐補(bǔ)充液氮，提高工作效率，保證樣品安全。

g）離心機(jī)：進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，常規(guī)需要進(jìn)行制備細(xì)胞懸液、調(diào)整細(xì)胞密度、洗滌、收集細(xì)胞等工作，通常需要使用離心機(jī)。

○a一般可常規(guī)配置4000rpm的G產(chǎn)臺(tái)式離心機(jī)，例如細(xì)胞沉降，使用80～100g的離心機(jī)即可，離心力過大有時(shí)可能引起細(xì)胞的損傷。

○b另外，可根據(jù)需要添置其他類型如大容量或可調(diào)節(jié)溫度的離心機(jī)等

○c若需特殊用途，例如某些細(xì)胞的分離制備需梯度離心，則需另行配置實(shí)驗(yàn)所需的具備其他特殊功能的離心機(jī)。

h）天平：常用的有扭力天平、精密天平及各種電子天平。

分析天平的感量為0.1mg、0.01mg和0.001mg。根據(jù)稱取物質(zhì)的量和稱量精度的要求，選擇適宜級(jí)別的天平。要求精密稱定時(shí)，當(dāng)取樣量大于100 mg 選用感量為0.1mg天平，在100－10 mg 選用感量為0.01mg 天平，小于10mg選用感量為0.001 mg天平 。

i）消毒器：直接或間接與細(xì)胞接觸的物品均需消毒滅菌處理。

常用：○a手提式高壓蒸汽消毒器

○b目前市場(chǎng)上，具有高效、安全、方便等性能，適用于各種器皿、液體、培養(yǎng)基的高壓滅菌裝置已在流通（如脈動(dòng)真空滅菌器）?？晒┦褂谜咴跍缇耐瑫r(shí)監(jiān)測(cè)滅菌容器內(nèi)的壓力和溫度，確保滅菌質(zhì)量和安全，并可通過記憶（儲(chǔ)存）支持系統(tǒng)改變各種參數(shù)（例如滅菌、排氣、加熱等參數(shù)），即使在進(jìn)行滅菌時(shí)發(fā)生停電故障，仍可保留所設(shè)定的參數(shù)

j）濾器：目前細(xì)胞培養(yǎng)工作中采用的培養(yǎng)用液，包括人工合成培養(yǎng)液、血清、消化用胰酶等常含有維生素、蛋白、多肽、生長因子等物質(zhì)，這些物質(zhì)在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能，因而上述液體多采用濾過消毒以除去細(xì)菌。

目前常使用的濾器有Zeiss濾器、玻璃濾器和微孔濾器，各種濾器有其使用原理和特點(diǎn)（后詳述）。

（2）培養(yǎng)用器皿：

a）培養(yǎng)器皿：供細(xì)胞接種、生長等用的器皿，可由透明度好、無毒的中性硬質(zhì)玻璃或無毒而透明光滑的特制塑料制成。

（a）玻璃培養(yǎng)器皿的優(yōu)點(diǎn)是多數(shù)細(xì)胞均可生長，易于清洗、消毒，可反復(fù)使用，并且透明而便于觀察；缺點(diǎn)是易碎，清洗時(shí)費(fèi)人力。

（b）塑料制培養(yǎng)器皿的優(yōu)點(diǎn)是一次性使用，廠家已消毒滅菌密封包裝，打開即可用于細(xì)胞培養(yǎng)操作。

常用的培養(yǎng)器皿：

培養(yǎng)瓶：由玻璃或塑料制成。主要用于培養(yǎng)、繁殖細(xì)胞。進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)瓶瓶口加蓋螺旋瓶蓋或膠塞，膠塞多用于密封培養(yǎng)。G產(chǎn)培養(yǎng)瓶的規(guī)格以容量（ml）表示，如250ml、100ml、25ml等；進(jìn)口培養(yǎng)瓶則多以底面積（cm2）表示。

培養(yǎng)皿：由玻璃或塑料制成，供盛取、分離、處理組織或做細(xì)胞毒性、集落形成、單細(xì)胞分離、同位素?fù)饺?、?xì)胞繁殖等實(shí)驗(yàn)使用。常用的培養(yǎng)皿規(guī)格有10cm、9cm、6cm、3.5cm等。

多孔培養(yǎng)板：為塑料制品?？晒┘?xì)胞克隆及細(xì)胞毒性等各種檢測(cè)實(shí)驗(yàn)使用。其優(yōu)點(diǎn)是節(jié)約樣本及試劑，可同時(shí)測(cè)試大量樣本，易于進(jìn)行無菌操作。培養(yǎng)板分為各種規(guī)格，常用的規(guī)格有：96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。

各種單層生長的細(xì)胞在培養(yǎng)器皿中長滿時(shí)可獲得的細(xì)胞數(shù)，主要是取決于器皿的底表面積和細(xì)胞體積的大小。常用培養(yǎng)器皿及可獲得的細(xì)胞數(shù)（以Hela細(xì)胞為例）見表2。

表2 常用的培養(yǎng)器皿及可獲得的細(xì)胞數(shù)

培養(yǎng)器皿 底面（cm2） 加培養(yǎng)液量（ml） 可獲細(xì)胞量

96孔培養(yǎng)板 0.32 0.1 1×105

24孔培養(yǎng)板 2 1.0 5×105

12孔培養(yǎng)板 4.5 2.0 1×106

6孔培養(yǎng)板 9.6 2.5 2.5×106

4孔培養(yǎng)板 28 5.0 7×106

3.5cm培養(yǎng)皿 8 3.0 2.0×106

6 cm培養(yǎng)皿 21 5.0 5.2×106

9 cm培養(yǎng)皿 49 10.0 12.2×106

10 cm培養(yǎng)皿 55 10.0 13.7×106

25cm塑料培養(yǎng)瓶 25 5.0 5×106

75 cm塑料培養(yǎng)瓶 75 15~30 2×107

25 ml玻璃培養(yǎng)瓶 19 4.0 3×106

100 ml玻璃培養(yǎng)瓶 37.5 10.0 6×106

250 ml玻璃培養(yǎng)瓶 78 15.0 7×107

2500 ml旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶 700 100~250 2.0×108

b）培養(yǎng)操作有關(guān)的器皿：

○a貯液瓶：主要用于存放或配制各種培養(yǎng)用液體如培養(yǎng)液、血清及試劑等。貯液瓶分為各種不同規(guī)格，如1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、5ml等。

○b吸管：主要分為刻度吸管、無刻度吸管。刻度吸管主要用于吸取、轉(zhuǎn)移液體，常用的有1ml、2ml、5ml、10ml等規(guī)格。無刻度吸管分為直頭吸管及彎頭吸管，除可以作吸取、轉(zhuǎn)移液體外，彎頭尖吸管還常用于吹打、混勻及傳代細(xì)胞。

○c加樣器（移液器）：用于吸取、移動(dòng)液體或滴加樣本。可根據(jù)需要調(diào)節(jié)量的大小，吸量準(zhǔn)確、方便。尤以微量加樣器，可保證實(shí)驗(yàn)樣品（或試劑）含量精確，重復(fù)性良好。目前，可高溫消毒的，多通道的各類移液器可供使用者選擇，能確保加樣準(zhǔn)確、快速、方便并且達(dá)到無菌要求。

c）其他用品：尚有收集細(xì)胞用的離心管，放置試劑或臨時(shí)插置吸管用的試管，裝放吸管以便消毒的玻璃或不銹鋼容器，用于存放小件培養(yǎng)物品便于高壓消毒的鋁制飯盒或貯槽，套于吸管頂部的橡膠吸頭，封閉各種瓶、管的膠塞、蓋子、凍存細(xì)胞用的安瓿或凍存管、不同規(guī)格的注射器、燒杯和量筒以及漏斗，超凈工作臺(tái)使用的酒精燈，供實(shí)驗(yàn)人員操作前清潔消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型噴壺等。

（3）器械：主要用于解剖、取材、剪切組織及操作時(shí)持取物件。常用的有：手術(shù)刀或解剖刀、手術(shù)剪或解剖剪（彎剪及直剪），用于解剖動(dòng)物、分離及切剪組織，制備原代培養(yǎng)的材料；眼科虹膜小剪（彎剪或直剪），用于將組織材料剪成小塊；血管鉗及組織鑷、眼科鑷（彎、直），用于持取無菌物品（如小蓋玻片）夾持組織等；口腔科探針或代用品，用以放置原代培養(yǎng)之組織小塊。

2、特殊設(shè)備

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室除了應(yīng)配備上述的常用基本設(shè)備以外，如有條件，可添置一些特殊或先進(jìn)的設(shè)備儀器，以便更有效、更精確、更深入地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室工作。例如：

（1）酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀——可用于進(jìn)行免疫學(xué)測(cè)定及細(xì)胞毒性、藥物敏感性檢測(cè)等。

（2） 超低溫冰箱（-85℃）——便于儲(chǔ)存某些試劑及標(biāo)本。

（3）旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器——用于某些特殊細(xì)胞或需要收獲大量細(xì)胞的培養(yǎng)。

（4） 熒光顯微鏡——進(jìn)行熒光染色樣本的觀察。

（5） 流式細(xì)胞儀——可更精確及快速檢測(cè)細(xì)胞。

（6）用于檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)條件的各種儀器，例如專門為快速分析細(xì)胞培養(yǎng)基中主要或關(guān)鍵營養(yǎng)成分、代謝產(chǎn)物及氣體含量設(shè)計(jì)的多功能細(xì)胞培養(yǎng)分析儀、手提式CO2濃度測(cè)定儀等。